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資訊詳情
MOPS緩沖液作為無磷培養基的的配方及注意事項
在以前的很多文章中,我們介紹過MOPS培養基的一些配置方法,但是并沒有講具體在配置過程中需要注意的事項,今天此文會非常詳細的把一些事項列舉出來,對于那些還沒有配置過MOPS培養基的朋友們,我們準備了一些MOPS培養基的配置方案。希望能給大家一些指引和幫助。
MOPS Minimal Medium
10X MOPS混合物 |
100毫升 |
|
0.132M K2HPO4 |
10毫升 |
|
H2O |
880毫升 |
|
1mg / ml硫胺素 |
0.1毫升 |
(可選-我們不使用硫胺素,因為它不會影響此培養基中大腸桿菌K-12 MG1655的生長速率。) |
全部的 |
990毫升 |
|
1.混合上面的成分,并用大約300微升的10M NaOH將pH值調節到7.2。
2.過濾消毒??梢栽?度下保存長達1個月。
3.使用前,添加10 ml 100X碳源(適當時-我們通常使用0.1%葡萄糖的最終濃度)。
10X MOPS混合物
1.在帶有攪拌棒的1 L燒杯中,將以下物質添加到約300 ml milliQ H2O中:
成分 |
固件 |
克 |
MOPS |
209.3 |
83.72 |
Tricine |
179.2 |
7.17 |
2.添加10 M KOH使其最終pH值為7.4(10至20 ml)
3.使總體積達到440ml。
4.制備新鮮的FeSO4溶液并將其添加到MOPS / Tricine溶液中:
成分 |
固件 |
克 |
H2O體積(毫升) |
庫存濃(M) |
FeSO4 •7H2O |
278 |
0.028 |
10 |
0.01 |
5.將以下解決方案添加到MOPS / tricine / FeSO4中(請參閱下面的方法,制作每種方法):按所示順序混合!
成分 |
體積 |
1.9M NH 4氯 |
50毫升 |
0.276M K2SO4 |
10毫升 |
0.02M氯化鈣2•2H2O |
0.25毫升 |
2.5 M氯化鎂2 |
2.1毫升 |
5 M氯化鈉 |
100毫升 |
微量營養素庫存 |
0.2毫升 |
高壓滅菌milliQ H2O |
387毫升 |
全部的 |
1000毫升 |
6.用容量為1L的0.2微米過濾器進行過濾滅菌
7.等分到100或200ml無菌塑料瓶中,并在-20°冷凍。
10倍MOPS混合物中使用的方法
分別制作,將指定的量混合到指定的體積中。存放在室溫下。
成分 |
固件 |
庫存濃(M) |
克 |
體積(毫升) |
筆記 |
NH4Cl |
53.49 |
1.9 |
50.82 |
500 |
|
鉀2SO4 |
174.3 |
0.276 |
4.8 |
100 |
|
氯化鈣2•2H2O |
147 |
0.02 |
0.294 |
100 |
|
氯化鎂2 |
203.3 |
2.5 |
50.75 |
100 |
|
氯化鈉 |
58.44 |
5 |
292.2 |
1000 |
|
微量營養素儲備液(100毫升)
將所有內容混合在40ml高壓滅菌的milliQ H2O中,使總體積達到50ml。存放在室溫下。
成分 |
分子式 |
固件 |
克50毫升 |
鉬酸銨 |
(NH4)6Mo7O24•4H2O |
1235.9 |
0.009 |
硼酸 |
h3BO3 |
61.83 |
0.062 |
氯化鈷 |
CoCl2 |
237.9 |
0.018 |
硫酸銅 |
CuSO4 |
249.7 |
0.006 |
氯化錳 |
MnCl2 |
197.9 |
0.040 |
硫酸鋅 |
ZnSO4 |
287.5 |
0.007 |
磷酸鉀K2HPO4溶液:
筆記??!確保使用二元K2HPO4,并且不要使用二元KH2PO4?。?!高壓滅菌后可在室溫下保存。
成分 |
固件 |
庫存濃(M) |
克 |
體積(毫升) |
筆記 |
K2HPO4 |
173.2 |
0.132 |
23.0 |
1000 |
高壓滅菌器 |